3 檢測
擴展基因代碼方便對比
地點:生物防護二級實驗室(PCR實驗室)
試管中的基因片段隨后將送進PCR實驗室。
李曉丹說,PCR儀是核酸檢測病毒的關(guān)鍵設(shè)備。最近幾天,他們針對甲型H1N1流感開發(fā)的檢測試劑盒,就將在這個環(huán)節(jié)發(fā)揮主要作用。
實驗人員將試管內(nèi)的一組基因片段放入檢測試劑配置的反應(yīng)液中,再置于PCR儀下,大概兩個半小時左右,每個基因片段都被放大,生成了大小不一的核酸擴展物CDNA(基因片段擴展物)。
同時,另一部分通過反應(yīng)液,被分裝在PCR小試管內(nèi)的核酸RNA(核糖核酸),則可以在特制模板中,通過與目標病毒基因片段的定時定量比對,由實驗人員讀出結(jié)果:是否為甲型H1N1流感病毒。
李曉丹說,為了確保檢測結(jié)果的準確無誤差,這個定時定量PCR檢測結(jié)果,只作為整個甲型H1N1流感病毒追索結(jié)論的一個參考。
4 確診
電泳膠內(nèi)篩顯病毒“原形”
地點:生物防護一級實驗室(綜合實驗室)
裝有不同基因片段擴展物的微小試管被送進綜合實驗室,這里的關(guān)鍵設(shè)備是盛滿了瓊脂糖凝膠、兩頭插著正負電極的矩形電泳檢測儀。
利用移液器,實驗人員將試管中微量的無色透明液體染色后,再放入充了電的膠“池”。
在電壓牽引推動下,膠池的表面開始密集冒起小氣泡,“那是病毒的基因擴展物在向另一個方向走,個頭大的產(chǎn)物走得慢,越是個頭小的產(chǎn)物走得越快!崩顣缘ふf,瓊脂糖凝膠電泳儀就像一面篩子,把病毒中每個基因片段都以特定的“大”、“小”影像顯現(xiàn)出來。
當然,上述景象人的肉眼無法看到。實驗人員讓“膠池”充電40分鐘,確保所有的擴展物都“運動”起來后,將“膠池”放進另一個特制的方形“鐵柜”中,這其實是一部紫外線下工作的“照相機”———凝膠成像儀。
成像儀內(nèi),紫外線燈發(fā)光,照射在凝膠上,然后對膠中染色發(fā)光的擴展物自動拍照,并輸出在連接的電腦屏幕上。
李曉丹介紹,電腦中還能同時調(diào)出甲型H1N1流感病毒基因序列圖,在同一個位置上,受檢病毒的數(shù)個基因片段擴展物大小與參照物完全相合,就能夠最終判斷,標本送檢患者感染了甲型H1N1流感病毒。
反之,排除感染可能。
李曉丹說,從病毒標本送至實驗室到最終檢測出結(jié)果,約需4—6小時。
甲型H1N1病毒檢測程序
醫(yī)生對疑似患者的鼻液或喉液取樣
送入流感網(wǎng)絡(luò)實驗室
提取多個基因片段,對逐個基因片段進行擴展(放大)
擴展物入膠染色,在紫外線燈下發(fā)光成像
與電腦中儲存的目標病毒基因片段對比,同一位置上,大小是否完全一致
若一致則能夠最終判斷,標本送檢患者感染了甲型H1N1流感病毒
本組稿件采寫/本報記者 魏銘言 本組稿件攝影/本報記者 王申
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